La cromatografia è un processo di separazione ampiamente utilizzato nei campi dell'ingegneria chimica e biochimica. È un processo altamente selettivo in grado di separare componenti con proprietà fisiche e chimiche simili. È importante sia a livello di elaborazione che di analisi di processo.

Descrizione.

Costituita da un'unità da banco su cui sono montate due colonne cromatografiche in vetro borosilicato lunghe 250 mm e con un diametro di 10 mm. Entrambe sono dotate di terminali regolabili per consentire di esaminare diverse altezze del letto. Sulla parte superiore di ogni colonna sono presenti iniettori a setto per consentire l'introduzione di un campione sulla superficie della colonna. Le colonne sono alimentate da una pompa peristaltica a tre canali con un design a otto rulli per fornire un flusso regolare. La pompa ha un azionamento a velocità variabile e può essere utilizzata un'ampia gamma di fori per tubi, offrendo così un intervallo di portata molto ampio.

Le valvole di commutazione consentono all'operatore di selezionare facilmente la colonna desiderata per l'operazione. Una trappola per bolle è montata prima dell'ingresso alle colonne per impedire l'ingresso di aria. L'uscita dalla colonna passa a una cella di flusso ottica UV per la misurazione dell'eluizione del campione. Il liquido che esce dalla cella di flusso può essere condotto allo scarico o raccolto utilizzando il collettore di frazioni, che è controllato da un timer e ha una capacità di quarantotto provette da 3 ml.

È essenziale che tutti i buffer e i campioni introdotti nella colonna siano filtrati e degassati per proteggere la colonna. L'attrezzatura richiesta per questo è l'attrezzatura standard da laboratorio.

I metodi richiesti per la cromatografia liquida richiedono un po' di pratica per ottenere risultati riproducibili. Pertanto, per gli utenti senza esperienza in questo settore si raccomanda di fornire una formazione.

La Chromatography Unit dimostra un tipo di cromatografia di importanza industriale, la cromatografia liquida a bassa pressione. Può dimostrare diverse varietà, tra cui la cromatografia a scambio ionico, a esclusione dimensionale, a interazione idrofobica e di affinità. Ognuno di questi tipi utilizza un diverso metodo di separazione, che sono rispettivamente carica delle particelle, dimensione e forma delle particelle, idrofobicità delle molecole e specificità biologica.

Il sistema include procedure sperimentali dettagliate per la cromatografia ad esclusione dimensionale, in particolare in relazione alla separazione di proteine ​​e coloranti. Tuttavia, può anche essere utilizzato per studiare altri tipi di cromatografia liquida a bassa pressione.

La cromatografia ad esclusione dimensionale utilizza sfere porose per separare particelle di dimensioni diverse. L'intervallo dimensionale dei pori nelle sfere definisce se le particelle sono totalmente escluse, parzialmente escluse o se hanno pieno ingresso in tutte le sfere. Le particelle totalmente escluse hanno il tempo di residenza più breve nella colonna, mentre le particelle che hanno pieno ingresso nelle sfere hanno il tempo di residenza più lungo. Le particelle parzialmente escluse hanno tempi di residenza compresi tra i due. Su questa base vengono separate particelle di dimensioni diverse.

Contenuto sperimentale

• Comprensione dei principi e delle pratiche della cromatografia liquida, tra cui:
  • – Riempimento di colonne
  • – Esempio di applicazione
  • – Sviluppo della colonna
  • – Analisi e raccolta delle frazioni
• Comprensione dei fattori che influenzano le prestazioni di separazione
• Comprensione della misurazione della concentrazione proteica tramite analisi UV
• Sono inclusi esercizi didattici dettagliati per dimostrare agli studenti gli aspetti importanti della cromatografia a esclusione dimensionale (filtrazione su gel). Le informazioni fornite includono dettagli su matrici di gel adatte, tamponi, proteine ​​ecc. e protocolli sperimentali approfonditi
• Sebbene gli esperimenti siano correlati solo al metodo di esclusione dimensionale, il sistema è adatto per l'uso con altri sistemi di cromatografia liquida a bassa pressione come scambio ionico, affinità e interazione idrofobica
• Il sistema include una cella a flusso UV per la misurazione della concentrazione proteica. Il livello di rilevamento è 0,1 mg/ml di proteine ​​(albumina sierica bovina)
• Comprensione dei protocolli di esecuzione dei sistemi di cromatografia liquida a bassa pressione
• Dimostrazione visiva della cromatografia ad esclusione dimensionale mediante coloranti
• Determinazione dell'effetto della portata e della lunghezza della colonna sulla separazione e sulla concentrazione del prodotto